"Cromatografía"

Objetivos

Ø Poner de manifiesto el principio de la técnica de cromatografía.

Ø Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias, característica y los factores que en ella intervienen.

Ø Realizar una cromatografía en papel de muestras de sacarosa y glucosa.

Resumen

Realizamos una cromatografía en papel de sacarosa y glucosa. Utilizamos una fase estacionaria (papel) y una móvil (agua) la cual nos hizo correr las muestras para luego revelarlas.

Marco Teórico

En toda separación cromatográfica hay una fase estacionaria y una fase móvil.

La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma posición. La fase móvil puede ser un líquido o un gas que corre a través de una superficie y de la fase estacionaria.

Las sustancias que están en un sistema de cromatografía interaccionan tanto con la parte estacionaria como con la fase móvil. La naturaleza de éstas interacciones depende de las propiedades de las sustancias así como también de la composición de la fase estacionaria.

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

Las técnicas cromatográficas^[1] son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Después de que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria, separándose, pasan por un detector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.

Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos da como resultado una retención diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:

• Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
• Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeñas.

Clasificación Métodos de separación: Clasificación de la cromatografía

Tipos	Fase móvil	Fase estacionaria
Cromatografía en papel	Líquido	Líquido ( moléculas de agua contenidas en la celulosa del papel )
Cromatografía en capa fina	Líquido	Sólido
Cromatografía de gases	Gas	Sólido o líquido
Cromatografía líquida en fase inversa	Líquido (polar)	Sólido o líquido (menos polar)
Cromatografía líquida en fase normal	Líquido (menos polar)	Sólido o líquido (polar)
Cromatografía líquida de intercambio iónico	Líquido (polar)	Sólido
Cromatografía líquida de exclusión	Líquido	Sólido
Cromatografía líquida de absorción	Líquido	Sólido
Cromatografía de fluidos supercríticos	Líquido	Sólido

Las distintas técnicas cromatográficas^[2] se pueden dividir según cómo esté dispuesta la fase estacionaria:

• Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales técnicas son:
• Cromatografía en papel
• Cromatografía en capa fina
• Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:
• Cromatografía de líquidos
• Cromatografía de gases
• Cromatografía de fluidos supercríticos

La cromatografía de gases es útil para gases o para compuestos relativamente volátiles, lo que incluye a numerosos compuestos orgánicos. En el caso de compuestos no volátiles se recurre a procesos denominados de "derivatización", a fin de convertirlos en otros compuestos que se volatilizen en las condiciones de análisis.

Dentro de la cromatografía líquida destaca la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC, del inglés High Performance Liquid Chromatography), que es la técnica cromatográfica más empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carácter no polar, y la fase móvil posee carácter polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporción de la misma, o de otros disolvente polares, como por ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta de sílice o alúmina, de carácter polar, y por tanto la fase móvil era un disolvente orgánico poco polar. Una serie eluotrópica, es un rango de sustancias de diferentes polaridades que actúan como fase móvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria.

Materiales

·        Frasco de vidrio

·        Gotero

·        Papel de cromatografía

Reactivos

·        Glucosa: es un monosacárido con forma molecular C₆H₁₂O₆, la misma que la fructosa pero con diferente posición relativa de los grupos –OH y O-. es una hexosa, es decir, tiene seis átomos de carbono.

·        Sacarosa: disacárido, formado por alfa-glucopiranosa y beta-fructofuranosa. Su fórmula molecular es C₁₂H₂₂O₁₁.

Esquema Experimental